一般來說，二十七味定坤丸不適宜對其過敏者、孕婦、感冒發熱者、體質壯實者、非氣血兩虛者等人群。
1、對其過敏者：如果對二十七味定坤丸中的一種成分過敏，服用后可能會出現過敏反應，如皮膚瘙癢、皮疹、紅腫等，嚴重者可能出現呼吸困難、喉頭水腫等危及生命的情況，所以過敏者不能服用。
2、孕婦：二十七味定坤丸是一種滋補氣血、調經舒郁的藥物，但其中的一些成分可能對胎兒有不良影響，而且在孕期，女性身體的激素水平和生理狀態發生變化，隨意服用可能會干擾正常的妊娠過程，導致胎動不安等情況，所以孕婦應避免使用。
3、感冒發熱者：此藥主要用于滋補，在感冒發熱期間，人體處于外感邪氣、正邪相爭的狀態。此時服用二十七味定坤丸，可能會使邪氣內閉，加重感冒發熱癥狀，不利于身體恢復，所以感冒發熱者不宜服用。
4、體質壯實者：二十七味定坤丸是為氣血兩虛、月經不調等虛弱體質人群設計的。體質壯實者本身氣血充足，不需要這種滋補藥物，服用后可能會導致體內氣血過盛，出現口干舌燥、心煩、便秘等上火癥狀。
5、非氣血兩虛者：該藥主要針對氣血兩虛的癥狀，如面色蒼白、頭暈目眩、月經量少等。如果不是這種體質類型，沒有相應的癥狀，服用后可能不會有預期的效果，還可能因為藥物不對癥而產生一些不良反應。
在使用二十七味定坤丸之前，應先了解自己的身體狀況和是否適合服用。如果不確定，建議及時就醫，在醫生的指導下使用，避免因不適當服用而帶來不良后果。